在構圖上，達·芬奇改變了以往畫肖像畫時采用側(cè)面半身或截至胸部的習慣，代之以正面的半身像構圖，透視點略微上升，蒙娜麗莎雙手交握，平行于畫面底邊，胳膊肘處在畫面的兩角，人的整個姿態(tài)形成金字塔構圖。拉斐爾等人都曾模仿過這種構圖。當然這在今天也仍有借鑒意義。
坐姿時，可以讓模特把手放在椅子把手上；站立時，讓模特手捧一束花，稍微側(cè)立都可以有效地形成金字塔構圖。另外讓人物會盡可能地填滿畫框，避免過多背景分散觀者注意力。
還有一個不能忽略的元素是，達·芬奇把蒙娜麗莎的眼睛安排在和觀者平視的角度。這樣，觀眾就會覺得是在直視蒙娜麗莎，而不是我們在仰視她或她在仰視我們。
